Aktywowana przez naskórkowy hydrolizę fosfoinozytydów w hodowanych szczurzych wewnętrznych komórkach rdzeniowych zbierających kanaliki. Regulacja przez białko G, wapń i kinazę białkową C.

Epidermalny czynnik wzrostu (EGF) wykazuje specyficzne nasycalne wiązanie z hodowanymi wewnętrznymi rdzeniowymi komórkami kanalików hodowlanych szczura i stymuluje wytwarzanie trisfosfonianu inozytolu (IP3) przez te komórki w sposób zależny od dawki. Stymulacja EGF stymulowana przez IP3 jest wzmacniana przez GTP gamma s lub AIF4- i jest hamowana przez GDP beta lub toksynę krztuścową. Zmiany w zewnątrzkomórkowym Ca2 + nie mają wpływu na produkcję IP3 stymulowaną przez podstawną lub stymulowaną EGF. Podobnie, leczenie EGTA, które zmniejsza stężenie Ca2 + w ...

Konkanawalina A hamuje aktywność koagulantów czynników tkankowych.

Konkanawalina A (con A) jest silnym inhibitorem koagulacyjnej aktywności natywnego czynnika tkankowego. Aktywność koagulantu odzyskuje się przez dodanie alfa-metylo-D-glukozydu w celu zahamowania czynnika tkankowego. Włączenie alfa-metylo-D-glukozy podczas inkubacji con A z czynnikiem tkankowym zachowuje aktywność koagulacyjną. Dane te sugerują, że con A oddziałuje odwracalnie z resztą węglowodanową w taki sposób, że hamuje aktywność koagulacyjną cząsteczki. Oczyszczona apoproteina czynnika tkankowego została rekombinowana z mieszanymi fosfolipidami móz...

Utlenianie określonej metioniny w trombomodulinie przez aktywowane produkty neutrofili blokuje aktywność kofaktora. Potencjalny szybki mechanizm modulacji krzepnięcia.

Trombomodulina śródbłonka (TM) odgrywa kluczową rolę w hemostazie jako kofaktor do zależnego od trombiny tworzenia aktywowanego białka C, silnego antykoagulanta. Chloramina T, H2O2 lub kwas podchlorynowy wytworzony z H2O2 przez mieloperoksydazę szybko niszczą 75-90% aktywności kofaktora TM. Aktywowany PMN, pierwotne źródło biologicznych utleniaczy in vivo, również szybko dezaktywuje TM. Utlenianie TM przez PMN jest hamowane przez difenylenodjodon, inhibitor oksydazy NADPH. Zarówno Met291 jak i Met388 w sześciu domenach powtórzeń typu naskórkowego podobnego...

Szlaki przetwarzania prekursora gastryny w błonie śluzowej szczura.

Prekursor gastryny hormonu stymulującego wydzielanie kwasu powoduje powstanie wielu peptydów różniących się znacznie pod względem aktywności biologicznej, ale odpowiednie szlaki biosyntezy są słabo poznane. Zastosowaliśmy przeciwciała przeciwko amidowanym gastrynom, gastrynom z końcowymi C-końcowymi gastrynami glicynowymi (Gly) z hydroksyglicyną na końcu COOH (GlyOH) i końcem COOH progastryny, do immunoprecypitacji peptydów znakowanych [35S] siarczanem lub [3H] tyrozyny podczas inkubacji śluzówki antralnej szczura in vitro. Wyznakowaną progastrynę wykryw...

Najnowsze zdjęcia w galerii e-gastrolog:

Protoporfiria erytropoetyczna. Fotoaktywacja układu dopełniacza.

Układ dopełniacza analizowano u 14 bezobjawowych pacjentów z protoporfirią erytropoetyczną. W większości badanych surowic poziomy składników dopełniacza C1, C4, C2 i C3 mieściły się w zakresie prawidłowym. Po napromieniowaniu próbek surowicy in vitro promieniowaniem ultrafioletowym (330-460 nm) zaobserwowano wyraźny spadek całkowitej aktywności hemolitycznej, któremu towarzyszyła redukcja poziomów C1, C4, C2 i C3. Utratę całkowitej aktywności hemolitycznej można bezpośrednio powiązać z poziomami protoporfiryny (PP), a podobne zmiany można uzyskać...

Amplifikacja zmienionych samoreaktywnych odpowiedzi limfocytów T cytopla-tycznych przez klonowane, allospecyficzne ludzkie komórki Th.

Badano wpływ klonowanej allospecyficznej ludzkiej komórki Th, zwanej 86, na wytwarzanie in vitro zmienionych autoreaktywnych cytolitycznych limfocytów T (CTL). Wykorzystując indukcję zmienionej haptenowo autoreaktywnej CTL jako modelu dla odporności komórkowej zależnej od guza lub nowotworu, ustaliliśmy, że obecność niewielkiej liczby komórek klonu 86 znacznie zwiększyła wytwarzanie zmodyfikowanych haptenowo autoreaktywnych CTL. Komórki zabójcze indukowane należą do podgrupy CD4-, CD8 +, są specyficzne dla autologicznych stymulowanych haptenem komórek obe...

Kultura in vitro komórek eksfoliowanych w moczu przez pacjentów z cukrzycą.

Jako podejście ułatwiające zrozumienie postępu cukrzycowej choroby nerek, ocenialiśmy mocz chorych na cukrzycę i normalnych ochotników na obecność komórek, które można hodować in vitro. Wyniki sugerują, że zarówno normalna grupa kontrolna jak i pacjenci z cukrzycą, bez klinicznie wykrywalnej mikroangiopatii, złuszczają kilka komórek w moczu. W przeciwieństwie do tego, chorzy na cukrzycę z udokumentowaną retinopatią, ale bez nefropatii złuszczają znacznie większą liczbę komórek zdolnych do hodowli (5,2 komórek / 100 ml moczu), podczas gdy osoby z...

Interleukina-10 moduluje ekspresję genów kolagenu typu I i metaloproteazy macierzy w hodowanych fibroblastach ludzkiej skóry.

IL-10, pierwotnie wyizolowana z komórek T pomocniczych myszy, jest cytokiną o funkcjach regulacyjnych na wielu interleukinach. W tym badaniu pokazujemy, że rekombinowana ludzka IL-10 wpływa na ekspresję kilku genów zaangażowanych w syntezę macierzy pozakomórkowej i przebudowę w ludzkich kulturach fibroblastów skóry. Jak oceniano w analizach Northern blot, ekspresja genów kolagenu typu I była obniżona, podczas gdy ekspresja genu kolagenazy i genu stromelizyny była znacznie wzmocniona przez IL-10. Nie stwierdzono wpływu na tkankowy inhibitor metaloproteaz pozio...

Kinetyka neutrofili u psa.

Wytwarzanie neutrofili u psów oszacowano na podstawie liczby neutrofilów postmitotycznych w szpiku i czasu przejścia impulsu [3H] -tymidyny. Liczba neutrofilów z postmitotią uzyskano z pomiaru erytroidalnego obrotu żelaza i liczby erytrocytów w przekrojach szpiku kostnego. Średnia wartość neutrofilów postmitotycznych szpiku u psów wynosiła 5,61 plus minus 0,56 razy 10-9 komórek / kg. Średni czas przejścia tych neutrofili obliczono na 82,1 h. Na podstawie tych danych obliczono produkcję szpiku z 1,65-krotnością 10-9 neutrofili / kg / dzień. Obrót krążąc...

Układ białkowy stymulujący adypsynę i acylację oraz regulacja wewnątrzkomórkowej syntezy triglicerydów.

Wcześniej charakteryzowaliśmy aktywność ludzkiego osocza, która znacząco stymuluje syntezę triglicerydów w hodowanych fibroblastach ludzkiej skóry i ludzkich adipocytach. Na podstawie jego aktywności in vitro nazwaliśmy aktywne białko stymulujące acylację (ASP). Określono molekularną tożsamość aktywnego składnika surowicy. Analiza sekwencji NH2-końcowych, spektroskopia masowa jonowo-natryskowa i analiza składu aminokwasowego wskazują, że aktywne oczyszczone białko jest fragmentem trzeciego składnika dopełniacza, C3a-desArg. Również eksperymenty re...

Włókna pośrednie w złośliwych czerniakach. Identyfikacja i zastosowanie jako markera w patologii chirurgicznej.

Włókna o średniej wielkości zostały zbadane w ludzkich czerniakach złośliwych i prawidłowych melanocytach za pomocą mikroskopii immunofluorescencyjnej z przeciwciałami skierowanymi przeciwko keratynie, wimentynie, desminie, białku neurofilamentu i białku włókna glejowego. Zarówno ludzkie guzy melanotyczne, jak i amelanotyczne oraz przerzuty nowotworowe, jak również normalne melanocyty w ludzkiej skórze i oku szczura zawierają wyłącznie pośrednie włókienka typu wimentyny. Nie zaobserwowano reakcji z przeciwciałami przeciwko keratynie, desminie, neurofi...

Cyklosporyna a. Hamowanie eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia błony naczyniowej u szczurów Lewisa.

Opisano tu cyklosporynę A (CS-A), selektywny inhibitor limfocytów T, aby zapobiec zapaleniu naczyniówki wywołanemu antygenem S (S-Ag) u szczurów Lewisa. S-Ag, występujący we wszystkich siatkówkach ssaków, wykazuje właściwości bodźcowopodobnych w warunkach eksperymentalnych, a pacjenci z pewnymi jednostkami uoditycznymi wykazują odpowiedzi komórkowe na ten antygen. Codzienne leczenie CS-A (10 mg / kg) rozpoczęło się w tym samym dniu, w którym immunizacja S-Ag całkowicie hamowała rozwój zapalenia błony naczyniowej w tym doświadczalnym modelu autoimmunolo...

Zaawansowane produkty glikozylacji wygaszają tlenek azotu i pośredniczą w zaburzeniach zależnych od śródbłonka naczyń w cukrzycy doświadczalnej.

Tlenek azotu (czynnik relaksujący pochodzenia śródbłonkowego) indukuje relaksację mięśni gładkich i jest ważnym mediatorem w regulacji napięcia naczyniowego. Zaawansowane produkty końcowe glikozylacji, ugrupowania pochodne glukozy, które tworzą się w sposób nieenzymatyczny i akumulują się na długowiecznych białkach tkankowych, zostały włączone do wielu powikłań cukrzycy i normalnego starzenia. Wykazujemy, że zaawansowane produkty glikozylacji hamują aktywność tlenku azotu in vitro i in vivo. Przyspieszenie zaawansowanego procesu glikozylacji in viv...

Badania kinetyczne i kinetyczne wapnia w idiopatycznej hiperkalciurii

Wagi wapniowe i badania kinetyki wapnia z użyciem 47Ca przeprowadzono u dziewięciu mężczyzn z idiopatyczną hiperkalciurią iu trzech zdrowych mężczyzn. Ostra redukcja spożycia wapnia u ośmiu pacjentów z idiopatyczną hiperkalciurią spowodowała zmniejszenie wydalania wapnia z moczem, przy czym ta ostatnia pozostała podwyższona powyżej tej zgłaszanej u zdrowych osób na diecie o niskiej zawartości wapnia. Pacjenci z hiperkalciurią mieli powiększoną mieszalną pojemność wapnia, zwiększoną szybkość obrotu wapnia, zwiększone tworzenie kości i szybkość...

Uwalnianie insuliny jest specyficzną anomeryczną glukozą u człowieka.

Anomer ?-glukozy powoduje większe uwalnianie insuliny niż beta-glukoza w różnych modelach zwierzęcych. Te anomery glukozy rozpuszczono szybko i podano dożylnie ludziom ochotnikom w wysokiej dawce (0,5 g / kg) w okresie 3 minut lub niskiej dawki (3,5 g) przez okres 20 sekund. Próbki krwi pobierano w częstych odstępach czasu w celu pomiaru stężenia glukozy w pełnej krwi (żelazicyjanek), glukozy w osoczu (beta-glukozowej oksydazy) i immunoreaktywnej insuliny w surowicy. Test wysokiego infuzji nie wykazał różnic między anomami ani poziomu glukozy we krwi, ani poz...

Hemoglobiny McKees Rocks (alpha2beta2145Tyr prowadzi do Term). Ludzka "nonsensowna" mutacja prowadząca do skróconego łańcucha beta.

Pierwszym przykładem przedwczesnego zakończenia łańcucha polipeptydowego u człowieka wydają się być Hb McKees Rocks, a beta145 Tyr prowadzi do Term, odkrytego u policystycznych członków rasy kaukaskiej. Mutacja punktowa najwyraźniej wystąpiła w kodonie dla Tyr beta145 z UAU do kodonu "nonsensownego", UAA lub UAG, skutkując skróconym łańcuchem polipeptydowym z Lys 144 jako jego aminokwasem na końcu karboksylowym. Dowodem tego strukturalnego wniosku jest brak peptydu tryptycznego betaT-15 z "odcisków palców" nieprawidłowego łańcucha be...

Estru prostaglandyny E2 i produkcji kolagenazy przez fibroblasty i komórki maziowe są regulowane przez ludzką interleukinę 1 i inhibitor (y) pochodzące z moczu.

Interleukina 1 (IL-1) ma liczne aktywności biologiczne, które mogą być selektywnie blokowane przez różne inhibitory. Niektóre znane inhibitory blokują czynnik aktywujący limfocyty (LAF / IL-1), ale nie czynnik komórek jednojądrzastych (MCF / IL-1) mierzony przez jego zdolność do stymulacji produkcji prostaglandyny E2 (PGE2) i kolagenazy. Obecność IL-1 in vivo może być trudna do wykrycia ze względu na obecność inhibitora (inhibitorów), a poziom inhibitora (inhibitorów) może się różnić w zależności od warunków patologicznych. Stwierdziliśmy, że m...

Wyrażanie genu interleukiny 1 zależnej od cyklu komórkowego przez hodowane kłębkowe komórki mezangialne.

Glomerularna mezangialna komórka (MC) - pochodna IL-1 może być ważnym czynnikiem w rozwoju hiperkomórkowości i stwardnienia charakterystycznych dla wielu postaci kłębuszkowego zapalenia nerek. Aby zdefiniować regulację syntezy IL-1 przez ludzkie MC, przeprowadzono analizę Northern blot przy użyciu specyficznych sond do monocytowego IL-1 alfa i beta mRNA. Proliferujący MC ulegał ekspresji mRNA zarówno dla IL-1 alfa, jak i beta, podczas gdy nieproliferujący MC nie zawierał wykrywalnego mRNA IL-1. Zsynchronizowany MC eksprymował mRNA IL-1 alfa i beta w ciągu 2...

Hamujące działanie met-enkefaliny na uwalnianie ACTH u człowieka.

W celu zbadania mechanizmu działania met-enkefaliny (FK 33824) na oś przysadkowo-nadnerczową, ośmiu normalnych ochotników płci męskiej poddano testowi stymulacji ACTH. Lizine-vasopressing (LVP), 5 IU, wstrzykiwano domięśniowo po wstępnym traktowaniu 0,5 mg FK 33824 im lub placebo. U sześciu pacjentów ponownie podawano opiaty przed pojedynczym wstrzyknięciem 0,25 mg ACTH. W regularnych odstępach czasu zbierano próbki beta 1-24 im Blood, a stężenia ACTH i kortyzolu analizowano we wszystkich próbkach. LVP indukował znaczący ACTH w osoczu (P <0,05) i kortyz...

Interleukina 2 pośredniczy w stymulacji biosyntezy dopełniacza C3 w ludzkich proksymalnych kanalikach nabłonkowych.

Poprzednie raporty sugerowały wytwarzanie składników dopełniacza C4, C2 i czynnika B przez tkankę nerkową. Komórki biorące udział w produkcji dopełniacza nie zostały jednak zidentyfikowane. W tym badaniu eksperymenty z etykietowaniem metabolicznym wykazały, że ludzkie komórki nabłonka kanalików proksymalnych (PTEC) syntetyzują prekursor o masie cząsteczkowej 180 kD, który jest wydzielany po cięciu proteolitycznym w dwułańcuchową cząsteczkę połączoną dwusiarczkiem, występującą w osoczu. C3 występujące w supernatantach hodowli PTEC było funkcjo...

Interakcja między Borrelia burgdorferi a śródbłonkiem in vitro.

Podczas patogenezy choroby z Lyme, Borrelia burgdorferi rozprzestrzenia się hematogennie od miejsca ukąszenia przez kleszcza do kilku tkanek w całym organizmie. Specyficzny mechanizm emigracji krętków jest obecnie nieznany. Stosując hodowane komórki śródbłonka żyły ludzkiej pępowiny, stwierdziliśmy, że Borrelia burgdorferi wiąże się z komórkami śródbłonka i macierzą podśródbłonkową. Izolaty o niskim pasażowaniu są 22-30 razy większe niż szczepy utrzymywane w hodowli w sposób ciągły. Wiązanie krętka z macierzą podśródbłonkową zostało z...

Ligacja kompleksu receptora komórek T powoduje aktywację kaskady Ras / Raf-1 / MEK / MAPK w ludzkich limfocytach T.

Stymulacja komórek T za pomocą przeciwciał skierowanych przeciwko kompleksowi receptora komórek T powoduje aktywację kinazy białkowej związanej z mitogenem (MAPK). W innych typach komórek opisano dwa szlaki, które mogą prowadzić do aktywacji MAPK. Jeden z tych szlaków obejmuje aktywację Ras, prowadząc do aktywacji Raf-1, a następnie aktywacji MEK (kinazy MAPK lub ERK). Zbadano udział tej drogi w limfocytach T w aktywacji MAPK za pośrednictwem anty-CD3 lub aktywowanej octanem forbolu (PMA). Wykryliśmy aktywność kinazy Raf-1 i MEK względem ich substratów (...

Wada w regulacji ekspresji genu II klasy kompleksu głównych tkanek w ludzkich negatywnych limfocytach HLA-DR od pacjentów z zespołem złożonych niedoborów odporności.

Pacjenci z autosomalnym recesywnym połączonym niedoborem odporności charakteryzują się HLA-ujemnym fenotypem aktywowanych limfocytów T i B. Aby określić molekularne podstawy tego zespołu, zbadaliśmy biosyntezę antygenów klasy I i II oraz ekspresję odpowiednich genów u tych pacjentów. Synteza ciężkiego łańcucha HLA A, B i C jest znacznie zmniejszona, podczas gdy mikroblobulina beta 2 jest wytwarzana w normalnych ilościach. Biosynteza łańcucha alfa i łańcucha alfa HLA-DR jest znoszona w limfocytach tych pacjentów i istnieje całkowity brak mRNA dla zar...

Autoprzeciwciało z komórek T antyhelpera w nabytej agammaglobulinemii.

Pacjent z nabytą agammaglobulinemią miał antyhelpowy czynnik limfocytów T, który został zidentyfikowany jako immunoglobulina z klasy IgG. Czynnik specyficznie związany z podzbiorem komórki TH2-T i, w obecności dopełniacza, zlikwidował efekt pomocniczy normalnych limfocytów T. Przeciwciało limfocytów T antyhelper poprzedziło kilkuletnie pojawienie się limfocytów T supresyjnych TH2 + Ia +, w którym to czasie przebieg kliniczny gwałtownie się pogarszał. Plazmafereza skutkowała limfocytozą i ponownym pojawieniem się funkcjonalnie nienaruszonej populacji li...

Przemijająca supresja hemopoeza klonalna związana z ciążą u pacjenta z zaburzeniem mieloproliferacyjnym.

Wykorzystaliśmy analizę polimorfizmu długości fragmentów restrykcyjnych w celu zbadania klonalnego zaangażowania komórek krwi u kobiety z chorobą mieloproliferacyjną, której początkowo wysoka liczba płytek krwi (940 000 / mikrolitr) spontanicznie spadła podczas normalnej ciąży, ale następnie szybko powróciła do tego samego wysokiego poziomu po dostawa jej dziecka. Analiza jej progenitorów erytroidalnych wykazała obecność prekursorów niezależnych od erytropoetyny przed, w trakcie i po jej ciąży, zgodnie z diagnozą choroby mieloproliferacyjnej i utrzy...

Charakterystyka mutacji punktowych w tym samym kodonie argininy u trzech niespokrewnionych pacjentów z niedoborem trankarbamylazy ornityny.

Mutacje punktowe w genie O-karnityniny sprzężonej z X zostały wykryte w tym samym miejscu restrykcyjnym Taq I w 3 z 24 niepowiązanych probandów z niedoborem OTC. Mutację de novo można prześledzić we wszystkich trzech rodzinach u osobnika w poprzednim pokoleniu, potwierdzając niezależny nawrót. Sekwencję DNA w regionie zmienionego miejsca Taq I określono w trzech probandach. W dwóch niepowiązanych męskich probandach z noworodkowym wystąpieniem ciężkiego niedoboru OTC wykryto mutację guaniny (G) do adeniny (A) na nici sensownej (antysensowna cytozyna [C] do...

Immunizacja antygenem powierzchniowym merozoitu Plasmodium falciparum indukuje częściową odporność u małp.

Małpy Saimiri immunizowane polipeptydem merozoitu Plasmodium falciparum o masie cząsteczkowej 41 kD są odporne na infekcję prowokowaną krwią, która indukuje piorunującą infekcję u kontrolnych małp. Surowice immunizowanych małp reagowały, jak pokazano techniką pośredniej immunofluorescencji, z wierzchołkową częścią merozoitów z pięciu izolatów lub klonów P. falciparum. To, czy immunogen był rozpuszczony w niejonowym detergencie (NP-40), czy w dodecylosiarczanie sodu (SDS) miało znaczący wpływ na poziom ochrony u immunizowanych małp. Tak więc małp...

Nieznaczny antygen zgodności tkankowej HY ulega ekspresji na ludzkich hematopoetycznych komórkach progenitorowych.

Polimorficzne pomniejsze transplantacyjne antygeny prawdopodobnie odgrywają ważną rolę we wszczepianiu odrzucanych przeszczepów szpiku kostnym za pośrednictwem układu immunologicznego. Mapowanie tych antygenów na hematopoetycznych komórkach progenitorowych (HPC) jest ważne, ponieważ te determinanty antygenowe mogą służyć jako struktury docelowe w procesie odrzucania, a ostatecznie otwiera możliwość dopasowania do tych antygenów. Zastosowanie cytotoksyczności komórkowej z cytotoksycznymi limfocytami T zależnymi od HY jako komórek efektorowych, zależne o...

Model in vitro ropnia krypt jelitowych. Nowa aktywność pobudzającego wydzielania neutrofili.

Aby modelować ropnie krypt, histologiczne odkrycie, które koreluje z aktywnością choroby w zapaleniu jelit, ludzkie leukocyty polimorfojądrowe (PMN) zostały nawarstwione na pojedyncze warstwy linii komórek nabłonka ludzkiego jelit T84, nabłonek przypominający kryptę, który jest zdolny do sekrecji Cl- . Takie interakcje PMN-nabłonek nie miały istotnego wpływu na spójność lub funkcję jednowarstwowej. Jednakże, gdy PMN były stymulowane przez warunki, w tym te obecne naturalnie w ludzkim świetle okrężnicy, monowarstwy odpowiedziały wrażliwym na bumetanid...

Ludzka linia komórkowa chłoniaka z wieloma rearanżacjami immunoglobulin.

Opracowanie systemu hodowli komórkowej skutecznego w tworzeniu linii komórkowych chłoniaka umożliwiło analizę podstawowych biologicznych i molekularnych aspektów komórek chłoniaka. Ustaliliśmy linię komórkową chłoniaka od pacjenta z chłoniakiem z limfocytów B. Linia komórkowa ma złożony kariotyp z translokacjami obejmującymi prążki 8q24, 14q32 i 18q21. Analiza molekularna wykazała, że gen Myc został zmieniony; nie byliśmy w stanie wykazać rearanżacji genu Bcl-2. Ocena struktury genu ciężkiego łańcucha Ig wykazała, że linia komórkowa niosła ...

Regulacja C / EBP beta genu alfa czynnika martwicy nowotworów.

Aktywowane makrofagi przyczyniają się do przewlekłego stanu zapalnego poprzez wydzielanie cytokin i proteinaz. Czynnik martwicy nowotworu alfa (TNF alfa) jest szczególnie ważny w tym procesie ze względu na jego zdolność do regulowania innych mediatorów stanu zapalnego w autokrynny i parakrynny sposób. Mechanizm (y) odpowiedzialny za regulację TNF alfa specyficznej dla typu komórek nie jest znany. Prezentujemy dane wykazujące, że ekspresja TNF alfa jest regulowana przez czynnik transkrypcyjny C / EBP beta (NF-IL6). C / EBP beta aktywowało promotor genu TNF alfa ...

Przeciwciało monoklonalne przeciwko ludzkiej płytkowej glikoproteinie IIIa wykrywa pokrewne białko w hodowanych ludzkich komórkach śródbłonka.

Wcześniej opisywaliśmy serię przeciwciał monoklonalnych przeciwko glikoproteinom błony płytkowej. Dwa z przeciwciał, B59.2 i B2.12, rozpoznają kompleks glikoproteiny IIb-IIIa. Te dwa przeciwciała reagują specyficznie z glikoproteiną (GP) IIIa, co pokazano na podstawie immunoblottingu żelu z dodecylosiarczanem-poliakryloamidowym żelem solubilizowanych błon płytkowych. Monoklonalny B2.12, ale nie B59.2, wiąże się z hodowanymi ludzkimi komórkami śródbłonka uzyskanymi z żyły pępowinowej, tętnicy biodrowej wewnętrznej i żyły dolnej dolnej. W stanie nas...

Oczyszczanie i częściowe sekwencjonowanie autoantygenu RA33 wykazuje, że jest on nie do odróżnienia od białka A2 heterogennego kompleksu jądrowego rybonukleoproteiny.

RA33 jest autoantygenem jądrowym o pozornej masie cząsteczkowej 33 kD. Autoprzeciwciała przeciwko RA33 występują w około 30% surowic od pacjentów z RA, ale tylko sporadycznie w surowicach od pacjentów z innymi chorobami tkanki łącznej. Aby scharakteryzować RA33, antygen oczyszczono z ekstraktów jądrowych komórek HeLa do uzyskania ponad 90% homogenności za pomocą chromatografii powinowactwa na heparynie-Sepharozie i przez chromatoogniskowanie. Analiza sekwencji pięciu peptydów tryptycznych ujawniła, że ich sekwencje odpowiadają odpowiadającym sekwencjom b...

Specyficzne wiązanie antygenu z ludzkimi limfocytami T.

Wykazano, że ludzkie limfocyty T uczulone na Candida albicans (CA) proliferują w hodowlach indukowanych mannanem, rozgałęzionym polisacharydem ekstrahowanym ze studzienki komórkowej CA. Obecnie opisujemy, że gdy używano silnie znakowanego [3H] mannanu, specyficzne dla antygenu komórki T były zdolne do wiązania znakowanego mannanu na ich błonie. Obserwacje, że nieistotne komórki blastyczne nie wiązały [3H] mannanu i że specyficzne dla mannanu komórki blastyczne nie wiązały się z trytowanym pneumokokowym polisacharydem SIII, wskazują na specyficzność wią...

Aktywacja transbłonowa za pośrednictwem czynnika płytkowego w ludzkich limfocytach B jest regulowana przez szlak wrażliwy na toksynę krztuśca i cholery.

Czynnik aktywujący płytki krwi (PAF) stymuluje ludzkie limfocyty B, powodując zwiększenie wewnątrzkomórkowego wapnia i uwalnianie fosforanów inozytolu. Ta droga przekazywania sygnału jest zahamowana w obecności krztuśca (PT) lub toksyny cholery (CT). Preinkubacja ludzkich komórek B za pomocą albo toksyny, ale nie ich nieaktywnych podjednostek, przez 3 h blokowała te indukowane PAF odpowiedzi w dwóch limfoblastoidalnych liniach komórkowych. Efekt ten był zależny od czasu, z pewną inhibicją odnotowaną po 30 minutach, ale dopiero po inkubacji wstępnej przez ...

Hemoglobina Mississippi (beta 44ser ---- cys). Badania fenotypu talasemicznego w mieszanej heterozygoty z beta-talasemią.

Hemoglobina Mississippi (HbMS: beta 44ser ---- cys) ma anomalne właściwości, które obejmują wiązania dwusiarczkowe z normalnymi łańcuchami beta-, delta, gamma i alfa, oraz tworzenie multimerów o wysokiej masie cząsteczkowej. Podczas gdy heterozygoty dla HbMS są klinicznie i hematologicznie normalne, a nosiciele genu beta + - talasemii w naszej rodzinie mają łagodną niedokrwistość mikrocytarną, proband z HbMS-beta + - talasemią ma poziom hemoglobiny równy 7 g / dl, średnią objętość krwinkową (MCV) ) 68 fl, retikulocyty 2-6%, HbF 18%, zaznaczono anizocy...

Korelacja między patogennością i wrażliwością na temperaturę w różnych odmianach Histoplasma capsulatum.

Porównaliśmy grzybni z drożdżowymi odmianami szczepu Downs Histoplasma capsulatum (niski poziom zjadliwości) z tymi z G184A i G222B, dwóch bardziej zjadliwych szczepów o różnych poziomach patogenności dla myszy. Gdy przemiany morfologiczne są inicjowane przez przesunięcie temperatury od 25 stopni do 37 stopni C, wszystkie trzy szczepy ulegają podobnym zmianom fizjologicznym, ale są one mniej poważne w G184A i G222B niż w szczepie Downs. Przejścia z morfologii grzybni do drożdży w obu bardziej zjadliwych szczepach są również o jedną trzecią szybsze niż...

Różnicowy wpływ cyklosporyny A na sygnalizację aktywacji w ludzkich liniach komórek T.

Różne linie komórek T, które można indukować do wydzielania interleukiny 2 (IL-2) in vitro, zastosowano do analizy wpływu cyklosporyny A (CsA). Komórka T białaczki Jurkat wymaga zwiększenia stężenia wapnia w cytoplazmie ([Ca ++] i) oraz octanu mirystynianu forbolu (PMA) w celu indukcji produkcji IL-2, która jest całkowicie zablokowana przez CsA. Inna linia komórek T, HUT 78, również wytwarza IL-2 w odpowiedzi na wzrost [Ca ++] i PMA; jednak w HUT 78 sama PMA indukuje niskie poziomy wytwarzania IL-2, które nie są blokowane przez CsA. Po traktowaniu 5-azacyty...

Zmiana reprezentacji podzbiorów komórek T CD8 naiwnych i pamięciowych u dzieci zakażonych wirusem HIV.

Komórki T CD8 są podzielone na podzbiory naiwne i pamięciowe, zależnie od funkcji i fenotypu. U dzieci z ujemnym wynikiem HIV podzbiór naiwny występuje na wysokich częstotliwościach, podczas gdy komórki pamięci są praktycznie nieobecne. Wcześniejsze badania wykazały, że całkowita liczba komórek T CD8 nie zmniejsza się u dzieci zakażonych wirusem HIV. W badaniach używamy wieloparametrowej cytometrii przepływowej do rozróżniania naiwnych komórek T pamięci CD8 w oparciu o ekspresję CD11a, CD45RA i CD62L. Dzięki tej metodologii pokazujemy, że w populacj...

Nadprodukcja deoksynukleozydów adeninowych i deoksynukletydów w niedoborze dezaminazy adenozyny z ciężką, złożoną chorobą niedoboru odporności.

Dezoksynukleotyd, dATP, jest podwyższony od 50 do 1000 razy powyżej normy w erytrocytach, limfocytach i szpiku kostnym od dziecka z niedoborem dezaminazy adenozyny i ciężką chorobą złożoną z niedoboru odporności. Dziecko w wieku 17 lat również wydalało około 30 mg dezoksyadenozyny na dobę w moczu (norma wynosi mniej niż 0,1 mg / dobę). Zmniejszono wydalanie kwasu moczowego w moczu. Podwyższony poziom dATP w limfocytach i szpiku kostnym oraz zwiększone wydalanie z moczem dezoksyadenozyny utrzymały się pomimo hiperterpresji krwi dziecka z napromieniowanymi ...

Adenowirusowa ekspresja bramkowanego napięciem kanału potasowego in vitro (szczurzych miocytów sercowych) i in vivo (wątroba szczura). Nowa strategia modyfikacji pobudliwości.

Pobudliwość zależy przede wszystkim od dopełnienia kanałów jonowych w błonie komórkowej, które kształtują kontur potencjału czynnościowego. Aby zmodyfikować pobudliwość poprzez transfer genów, stworzyliśmy rekombinowany adenowirus zaprojektowany do nadekspresji kanału potasowego Drosophila Shaker (AdShK). In vitro, wiele rodzajów komórek ssaków zakażonych AdShK wykazało silną ekspresję egzogennego kanału. Spontaniczne potencjały czynnościowe zarejestrowane z miocytów sercowych w hodowli pierwotnej zostały skrócone w porównaniu z nieinfekowanym...

Wykorzystanie hodowanych ludzkich komórek limfoidalnych do wykrywania uczulenia humoralnego u potencjalnych biorców przeszczepów nerek.

Potencjalni biorcy przeszczepów nerki byli testowani pod kątem limfocytotoksyczności; z nich wybraliśmy 102 surowice pozbawione przeciwciał cytotoksycznych przeciwko limfocytom obwodowym z co najmniej 80 niespokrewnionych osób. W celu wykrycia uczulenia humoralnego, poddaliśmy je reakcji z 17 hodowanymi ludzkimi limfocytowymi liniami komórkowymi mającymi różne fenotypy HL-A. Przeciwciała cytotoksyczne reagujące z tymi hodowanymi komórkami zostały teraz wykryte w niektórych surowicach. Przeciwciała te nie były skierowane przeciwko antygenom HL-A, ale pośredn...

Chromogranina A w prawidłowych i złośliwych tkankach ludzkich.

Wykorzystano rekombinowaną sondę cDNA do ludzkiej chromograniny A do pomiaru ekspresji mRNA kodowanego przez ten gen w różnych prawidłowych tkankach ludzkich i próbkach nowotworowych przy użyciu analizy hybrydyzacji Northern i hybrydyzacji in situ. Z kilkoma wyjątkami ekspresja mRNA chromograniny A wydaje się być ograniczona do prawidłowych tkanek i nowotworów linii neuroendokrynnej. Jednakże wykryliśmy ekspresję mRNA tego genu w 1 z 14 linii komórkowych i 2 z 13 próbek guza gruczolakoraka okrężnicy. Stwierdzenie ekspresji chromograniny A w niektórych raku...

Hiperkalcemia wywołana arotynoidem u szczurów poddanych thyroparathyroidectomized. Nowy model do badania resorpcji kości in vivo.

Model stymulowanej resorpcji kości opracowano przy użyciu syntetycznego retinoidu u szczurów poddanych thyroparathyroidectomized. Retinoidy spowodowały wzrost resorpcji kości i liczbę kręgowych osteoklastów podokostnowych. Wynikowy wzrost stężenia Ca w osoczu można wykorzystać jako łatwo mierzony wskaźnik resorpcji kości. Trzy bisfosfoniany powodowały zależne od dawki zapobieganie i odwracanie hiperkalcemii wywołanej retinoidami. Ich moc była podobna do poprzednio uzyskiwanej przez histomorfometrię. Napromieniowanie (600 rad) szczurów zapobiegło hiperkal...

Substytucja gamma-metionina-310 do treoniny i wynikająca z tego N-glikozylacja na gamma asparaginie-308 zidentyfikowana w wrodzonej dysfibrinogenemii związanej z pourazowym krwawieniem, fibrynogen Asahi.

W nieprawidłowym fibrynogenie z poważnie upośledzoną polimeryzacją monomerów fibryny, zidentyfikowaliśmy substytucję metionina-to-treonina w pozycji 310 łańcucha gamma. Ponadto stwierdzono, że asparagina w pozycji 308 była N-glikozylowana z powodu nowo utworzonej sekwencji konsensusowej, asparagina (308) -glicyna (309) -treonina (310). Dwa defekty strukturalne w zmutowanym łańcuchu gamma mogą zaburzać konformację wymaganą do polimeryzacji monomeru fibryny, która jest specyficznie przypisana do domeny D fibryny. Ta zmiana wydaje się również wpływać na m...

Rola pleocytozy płynu mózgowo-rdzeniowego i kapsułki Haemophilus influenzae typu b na przepuszczalność bariery krew-mózg podczas doświadczalnego zapalenia opon mózgowych u szczurów.

Wpływ leukocytów i kapsułki Haemophilus influenzae typu b (Hib) na przepuszczalność bariery krew-mózg (BBBP) na krążącą albuminę 125I u szczurów normalnych i leukopenicznych oceniano po wewnątrzczaszkowym zaszczepieniu kapsułkowanych (Rd- / b + / 02) lub bez kapsułek (Rd). - / b- / 02) izogeniczne szczepy Hib. Zarówno zwierzęta normalne jak i leukopeniczne zwiększyły BBBP 18 godz. Po inokulacji, przy normalnych szczurach wykazujących znacząco zwiększone BBBP po prowokacji zakapsułowanym szczepem. Pomimo pleocytozy płynu mózgowo-rdzeniowego (CSF) u zdr...

Zapalenie kłębuszków nerkowych indukowane u królika przez przeciwciała przeciwdepolarne.

W kłębuszkach królika badano wpływ interakcji między śródbłonkowym enzymem konwertującym angiotensynę (ACE) a kozim anty-króliczym ACE (GtARbACE). Przez immunofluorescencję ACE nie było wykrywalne w normalnych kłębuszkach nerkowych. Jednakże, gdy nerki poddawano perfuzji przeciwciałami GtARbACE, kłębuszkowe związane IgG były siedmiokrotnie wyższe niż IgG nie-immunologiczne, a złogi ziarniste IgG kozich znaleziono na śródbłonku kłębuszków i tętnic. Króliki wstrzyknięte dożylnie przez 4 dni przeciwciałami GtARbACE wykazały w dniu 1 ziarniste ...

Lokalizacja miejsca wiązania tkankowego aktywatora plazminogenu z fibryną.

Funkcjonalnie aktywne łańcuchy A i B oddzielono od dwułańcuchowej postaci rekombinowanego tkankowego aktywatora plazminogenu po łagodnej redukcji i alkilowaniu. Stwierdzono, że łańcuch A jest odpowiedzialny za wiązanie z lizyną-Sepharozą lub fibryną, a łańcuch B zawierał katalityczną aktywność tkankowego typu aktywatora plazminogenu. Znaczna redukcja dwułańcuchowego tkankowego aktywatora plazminogenu zniszczyła jednak zarówno aktywność wiążącą, jak i katalityczną. Fragment termolityczny, Fr. 1, z tkankowego aktywatora plazminogenu, który zawiera...

Wykrywanie częstego polimorfizmu długości fragmentów restrykcyjnych w locus ludzkiego beta receptora antygenowego komórek T. Potencjalne narzędzie diagnostyczne.

Nieprawidłowa funkcja limfocytów T jest cechą spektrum dziedzicznych i nabytych chorób. Wykryliśmy częsty polimorfizm długości fragmentów restrykcyjnych w locus ludzkiego łańcucha beta receptora komórek T, który może pomóc w analizie tych zaburzeń. Badanie panelu 18 normalnych osobników, testujących obecność polimorfizmu, wykazało, że stanowi on 36% alleli w tej grupie. Biorąc pod uwagę fakt, że locus łańcucha beta receptora komórek T został zmapowany do chromosomu 7 i że ataksja teleangiektazja (AT) choroby jest związana zarówno z nieprawidło...

Zależność między fenotypem apolipoproteiny (a), stężeniem lipoproteiny (a) w osoczu i funkcją receptora lipoprotein o małej gęstości w rodzinnej hipercholesterolemii z powodu mutacji pro664 ---- leu w genie receptora LDL.

W dużej grupie 66 osób 22 zidentyfikowano jako heterozygotyczne, a 3 jako homozygotyczne pod względem mutacji (pro664 ---- leu) w genie receptora LDL, co prowadzi do rodzinnej hipercholesterolemii (FH). Wszystkie heterozygoty miały podwyższony poziom całkowitego cholesterolu w osoczu i cholesterolu lipoprotein niskiej gęstości, ale były wyjątkowo wolne od przedwczesnej choroby wieńcowej. Oznaczenie stężenia apolipoproteiny (a) (apo (a)) i lipoproteiny (a) (Lp (a)) w osoczu wykazało, że w wielu przypadkach u osób z różnymi fenotypami apo (a) nie było różni...

Bezpieczeństwo i immunogenność szczepionki koniugatowej O-polisacharyd A Pseudomonas aeruginosa u ludzi.

Wolny od lipidy A polisacharyd (PS) wyizolowany z lipopolisacharydu Pseudomonas aeruginosa immunotyp 5 (LPS) był kowalencyjnie sprzężony z toksyną A przez redukcyjne aminowanie. Koniugat PS-toksyny A składał się z 29,8% PS i 70,2% toksyny A, o masie cząsteczkowej większej niż 1 X 10 (6), był nietoksyczny dla zwierząt i nie był pirogenny dla królików w dawce 50 mikrogramów / kg ciała wt. po podaniu dożylnym. Koniugat wywoływał jedynie łagodne, przejściowe reakcje po podaniu podskórnym ochotnikom. Szczepionka wywoływała przeciwciało G (IgG) immunoglobu...

Nowy mobilny element wstawiony do genu alfa-spektraminy: spectrin dayton. Skrócona alfa-spektryna związana z dziedziczną eliptocytozą.

Nonwirusowe retrotranspozony, retroporogeny i krótkie przeplatane elementy jądrowe (SINE) są ruchomymi segmentami DNA zdolnymi do przeniesienia do nowych lokalizacji genomowych, gdzie mogą zmieniać ekspresję genów. Integracja de novo do określonych genów została opisana zarówno w komórkach zarodkowych, jak i somatycznych. Zgłaszamy rodzinę z dziedziczną eliptocytozą i piropoikilocytozą związaną ze skróconym białkiem alfa-widryny. Prezentujemy biochemiczną charakterystykę tego nieprawidłowego białka i wykazujemy, że gen alfa-spektryny jest zakłócany...

Bromodeoksyurydyna w guzach i chromosomach wykrywana za pomocą przeciwciała monoklonalnego.

Stosując przeciwciało monoklonalne do bromodeoksyurydyny (BUdR) i immunohistochemię, zmierzyliśmy inkorporację tego analogu tymidyny do DNA normalnych i złośliwych komórek człowieka eksponowanych in vivo. BUdR podawany w postaci stałej infuzji dożylnej przez 12 lub 24 h dziennie przez okres do 13 dni powodował w stanie stacjonarnym poziom 10 (-6) M podczas infuzji. Wykazaliśmy szerokie włączenie BUdR do obu normalnych komórek skóry, normalnego szpiku kostnego i komórek czerniaka złośliwego. Ponadto infuzja BUdR była odpowiednia do zidentyfikowania wymiany...

Wadliwy wzrost in vitro hemopoetycznych komórek progenitorowych w zespole nabytego niedoboru odporności.

Oprócz zaburzeń immunologicznych, nieprawidłowości hematologiczne zgłaszano u większości pacjentów z zespołem nabytego niedoboru odporności (AIDS). W tym badaniu oceniano 15 pacjentów z AIDS lub zespołem związanym z AIDS (ARC) pod kątem wzrostu in vitro hemopoetycznych komórek progenitorowych. U wszystkich pacjentów stwierdzono istotne zmniejszenie wzrostu (średnia ? SEM) jednostki tworzącej kolonie - granulocytów, erytrocytów, makrofagów, (megakariocytów) (CFU-GEM) (1,2 +/- 0,3), jednostek erytroidalnych tworzących pęk ( BFU-E) (17 +/- 10), megakarioc...

Trwałe wadliwe sprzęganie receptorów dopaminy-1 z białkami G po solubilizacji z proksymalnych kanalików nerki u szczurów z nadciśnieniem.

Natriuretyczne działanie agonistów dopaminy-1 (DA-1) jest zmniejszone u szczurów z samoistnym nadciśnieniem (SHR), częściowo z powodu wadliwego sprzężenia z cyklazą adenylanową receptora DA-1 (AC) w kanalikach proksymalnych w kanalikach proksymalnych. W celu zbadania tego wadliwego sprzężenia, receptory dopaminy DA-1 z kanalików proksymalnych nerki solubilizowano i rekonstytuowano w pęcherzyki fosfolipidowe. Wiązanie selektywnego ligandu DA-1 [125I] SCH 23982 było specyficzne i nasycalne, bez różnic w gęstości receptora lub Kd między szczurami SHR i normo...

Genetyczne determinanty masy kostnej u dorosłych. Podwójne badanie.

Względne znaczenie czynników genetycznych w określaniu masy kostnej w różnych częściach szkieletu jest słabo poznane. Kręgosłup lędźwiowy i gęstość mineralną kości bliższej kości udowej oraz mineralną zawartość kości przedramienia mierzono metodą absorpcjometrii fotonów w 38 bliźniaczych parach monozygotycznych i 27 dizygotycznych. Gęstość mineralna kości była istotnie silniej skorelowana w przypadku bliźniąt jednojajowych niż bliźniąt dwuzygotycznych w przypadku kręgosłupa i bliższej części kości udowej oraz przedramienia przedsezonu...

Identyfikacja ludzkiego epitopu specyficznego w konserwatywnym regionie autoantygenu La / SS-B.

Wiadomo, że ludzkie autoprzeciwciała anty-La / SS-B reagują z wysoce konserwatywnymi epitopami sugerowanymi jako miejsca funkcjonalne lub aktywne na polipeptydzie La / SS-B. To badanie zaprojektowano w celu określenia, czy autoprzeciwciała reagują również ze słabo konserwowanymi regionami La / SS-B, jak przewidziano w odpowiedzi autoimmunologicznej opartej na antygenie. Wiązanie ludzkich autoprzeciwciał z oczyszczonymi ludzkimi, mysimi i bydlęcymi rekombinowanymi fragmentami reprezentującymi immunodominujące regiony polipeptydu La / SS-B porównano stosując Wes...

Sn-protoporfiryna hamuje wywołaną chemicznie eksperymentalną porfirię wątrobową. Potencjalne implikacje kliniczne.

Zdolność Sn (cyny) -protoporfiryny do hamowania indukcji syntazy wątrobowej delta-aminolewulinianu (ALA) przez alliloizopropyloacetamid (AIA) badano u dorosłego szczura. Dawki Sn-protoporfiryny wynoszące 1, 10 i 50 mumoli / kg masy ciała powodowały zmniejszenie indukowanej przez AIA wątrobowej aktywności syntazy ALA, odpowiednio, o 32, 52 i 60%, w porównaniu ze szczurami leczonymi samą AIA; hamowanie syntazy ALA nie było bezpośrednim efektem Sn-protoporfiryny. To zahamowanie aktywności enzymatycznej w wątrobie znalazło odzwierciedlenie w równoczesnym zmniejsz...